Topmusicanswers
Säädä hehkutuslämpötiloja, koska suuret PCR-lisäaineiden tai apuliuottimien pitoisuudet heikentävät alukkeen sitoutumista kohteeseen. Lisää DNA -polymeraasin määrää tai käytä DNA -polymeraaseja, joilla on korkea prosessiivisuus.
...
- Sekvenssivirheet PCR -tuotteiden päissä.
- Väärin positiivinen monistus.
- Resurssit.
- Mitä yleisiä vianmäärityksiä PCR: ssä voi tapahtua??
- Miksi PCR ei toimi??
- Mikä aiheuttaa PCR -tahran?
- Mitä tapahtuu, jos hehkutuslämpötila on liian korkea?
Mitä yleisiä vianmäärityksiä PCR: ssä voi tapahtua??
PCR -vianmääritysopas
| Ongelma | Syyt |
|---|---|
| Alhainen tai ei ollenkaan PCR -tuotteen saanto | Thermocycler -ohjelman hehkutus ja jatkolämpötilat eivät ole optimaalisia |
| Reaktiosta puuttuu Taq -polymeraasi tai muu reaktiokomponentti | |
| Alukkeen pitoisuus liian alhainen | |
| Kohdesekvenssi ei ole DNA -mallissa |
Miksi PCR ei toimi??
Vain yhden PCR -reaktion komponentin unohtaminen, olipa se sitten DNA -polymeraasi, alukkeet tai jopa templaatti -DNA, johtaa epäonnistuneeseen reaktioon. Yksinkertaisin ratkaisu on toistaa reaktio. ... Jos PCR -tuotetta ei vieläkään ole tämän jälkeen, on todennäköistä, että jokin muu estää reaktiota.
Mikä aiheuttaa PCR -tahran?
DNA -kontaminaatio, RNA DNA -näytteessä, DNA: n korkea pitoisuus PCR -reaktiossa voi aiheuttaa tahroja. ... Yleensä DNA: n tahrautuminen johtuu kasveista templaatti -DNA: n suuren pitoisuuden vuoksi.
Mitä tapahtuu, jos hehkutuslämpötila on liian korkea?
Hehkutuslämpötila oli liian korkea
Jos hehkutuslämpötila on liian korkea, alukkeet eivät pysty sitoutumaan templaattiin. Nyrkkisääntönä on käyttää hehkutuslämpötilaa, joka on 5 ° C alempi kuin Tm alukkeesta.
