Topmusicanswers
- Miksi PCR: ssä ei ole vahvistusta??
- Miksi DNA: ni ei vahvistunut?
- Mitä tapahtuu, jos alukkeita ei lisätä PCR: ään?
- Kuinka korjaat epäspesifisen vahvistuksen PCR: ssä?
Miksi PCR: ssä ei ole vahvistusta??
Vahvistus voi olla riittämätön, jos mallin alkuperäinen määrä on liian pieni. Lisää vahvistussyklien määrää 5 askeleella tai, jos mahdollista, lisää mallin määrää. DNTP -seoksen epäpuhtaudet voivat johtaa epätäydelliseen tai virheelliseen monistukseen tai PCR -inhibitioon. Käytä korkealaatuisia dNTP-protokollia.
Miksi DNA: ni ei vahvistunut?
1) sinulla voi olla huono alukemalli tai reaktiostandardointi (arvioi siis alukemallisi ja tee, kuten muut jo sanoivat, gradientti -PCR eri hehkutuslämpötilojen arvioimiseksi); 2) Ei DNA: ta (uuttokäytäntösi on saattanut epäonnistua), joten alukkeesi voivat vain hehkuttaa toisiaan (tai hämärtää niitä).
Mitä tapahtuu, jos alukkeita ei lisätä PCR: ään?
Kysymys: Jos unohdit lisätä alukkeet PCR -reaktioosi, mitä tapahtuisi ja miksi? 1. Reaktio epäonnistuu, koska Taq -polymeraasi ei voi lisätä emäksiä ilman pientä DNA -palanen läsnäoloa. ... Reaktio epäonnistuu, koska ei ole entsyymiä, joka voisi lisätä uusia nukleotidiemäksiä.
Kuinka korjaat epäspesifisen vahvistuksen PCR: ssä?
Käytä vähemmän jaksoja, kun mallipitoisuus on korkea, ja käytä enemmän jaksoja, kun mallipitoisuus on alhainen. 2. Jatkoaika oli liian pitkä: Liiallinen jatkoaika voi sallia epäspesifisen vahvistuksen. Käytä yleensä jatkoaikaa 1 min/kb.
